Contaminação microbiana no armazenamento de escovas de dentes

O estudo da contaminação microbiana no armazenamento de uma escova de dentes em um banheiro com um banheiro

Resumo

Objetivos: Examinar a contaminação microbiana de armazenar uma escova de dentes no banheiro com um banheiro entre a Unidade de Formação de Colônias (CFU) de grupos microbianos.

Métodos e resultados: Os resultados são analisados ​​pela contagem de CFU de placas de ágar

Conclusão: A escova de dentes que armazena em uma casa de banho com um banheiro ou sem banheiro está sendo contaminada e é um lugar ruim para armazenamento

Significado e impacto do estudo:

Introdução

Escherichia coli (E. coli) é reconhecida como uma bactéria coliforme que é gram negativa, desenvolvida anaerobicamente e com a forma de uma haste. É geralmente encontrado no intestino de animais de sangue quente, como humanos. Além disso, E.coli é capaz de se descarregar no ambiente com substância fecal sob condições aerotransportadas, especialmente pela descarga do banheiro e as bactérias podem crescer numericamente em substâncias fecais frescas por períodos curtos de forma aeróbica. Os aerossóis bacterianos pelo rubor podem se mover até seis a oito metros de distância do banheiro. Uma superfície úmida e quente permite que mais bactérias cresçam e as cerdas da escova de dentes aumentariam a área de superfície para a adesão microbiana, portanto, a transmissão fecal-oral pode ser usado como uma rota importante através da qual a estirpe patogênica de bactérias para introduzir em doenças bucais. Aparentemente, a ocorrência de coliformes fecais em água não é diretamente prejudicial e não expressa essencialmente a presença de fezes (Doyle, MP e MC Erickson, 2006).

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Foram utilizados cinco tipos de placas com os grupos microbianos nesta experiência.

O agar de sangue de chocolate, CBA, é um elemento não seletivo e um meio com desenvolvimento enriquecido usado para fastidioso isolamento bacteriano. [ 1] [ 2] [ 3] É uma alternativa do agar de sangue placa que contém glóbulos vermelhos lysed por aquecimento moderado a 80 ° C.

O Agar 2A do Reasoner, R2A, é utilizado para o isolamento de bactérias heterotróficas de água potável tratada (Sandle, T, 2004). Essas bactérias tendem a crescer lentamente e serão rapidamente restringidas por espécies de rápido crescimento em um meio rico.

Diagnóstico Pseudomonas Isolation Agar, PYO, é utilizado para o isolamento e diferenciação de Pseudomonas aeruginosa seletivamente, aumentando a produção de piocianina. A produção de piocianina é indicada como um pigmento solúvel em água azulada que dá uma cor esverdeada na mídia (Bodey, G.D., et al., 1989). O extrato de malte Agar, ME, é usado para o cultivo e isolamento de leveduras e moldes por meio de suprimento adequado de nutrientes (7) . O pH é modificado para quase 5,5 para melhorar o crescimento de fungos e prejudicar ligeiramente o crescimento bacteriano, que geralmente se determina como contaminantes ambientais. (6) O caldo de Lauril Sulfato, LTA, é usado para o isolamento de coliformes na água e alimentos. Os grupos de coliformes envolvem anaeróbios aeróbicos e facultativos, gram-negativos e os bacilos sem esporos que podem progredir na fermentação da lactose e gerar ácido e gás a 35 ° C. Além disso, o LTA44 o C faz com que os coliformes fecais sejam enumerados e o Lauril Sulfato de Sódio demonstra excelente inibição de organismos, exceto os coliformes.

Exemplo de pedidos concluídos

A técnica de espalhamento de placas é utilizada para o isolamento e enumeração de microorganismos em cultura mista por alocação uniforme. Este método pode medir as bactérias mais facilmente usando um espalhador esterilizado e aplicando uma pequena quantidade de suspensão de bactérias na superfície da placa. A placa é necessária para ser seca antes da incubação para que as bactérias possam ser absorvidas rapidamente no agar. A contagem de placas aproximada da quantidade de células depende da capacidade de produzir colônias sob determinados estados de meio nutritivo, temperatura e tempo. A contagem de CFU acredita que todas as colônias são agregadas e observadas por uma única célula viável. [1]

Lista de seções

Material e métodos

Exemplo de coleções e suspensões de preparação de amostras

Grupo 1 , armazenado normalmente na pia em uma casa de banho que continha um banheiro situado a 0,5 - 2 m da pia. Grupo 2 , não armazenado perto de um banheiro. Escove ou seja armazenada no quarto ou no banheiro sem o banheiro.

As amostras de placa, escova de dentes, pia e água da torneira foram coletadas pelo respectivo método estéril. A amostra de placa foi colocada em uma solução de 2,5 ml de Ringer e sonicada por 10 minutos. Em seguida, o peso da amostra de placa é determinado pela pesagem do frasco bijou e o palito de dente é removido por técnicas assépticas. A amostra de escovas de dentes é colocada na solução de Ringer de 10 ml em uma garrafa Universal e a cabeça da escova de dentes é cortada e removida assepticamente. O cotonete originado de 2 x 2 cm quadrado da amostra da pia é colocado na solução de 2,5 Ringer da garrafa bijou e é submetido a vórtex por aproximadamente 3 minutos. Em seguida, o cotonete é retirado por técnicas estéreis e a suspensão é assegurada para espremer o cotonete. A amostra de água da torneira é colocada nos 15 ml de tubo estéril.

diluições de 10 vezes e espalhamento de placas

Cada uma das amostras foi processada com ordens de placa, escova de dentes, pia e água da torneira. Diferentes diluições de amostras são preparadas pelas diluições de 10 vezes que esperam as amostras de água da torneira. 0,5 ml de suspensão original não diluída (10 0 ) são removidos e inoculados em 4,5 ml de outra solução de Ringer de forma asséptica e misturados bem para ser uma diluição 10 -1 . Todas as amostras são preparadas até 10 -5 .

Quatro placas de CBA, R2A, ME e duas placas de PYO, LTA37 e LTA44 de cada amostra foram coletadas e rotuladas. Para a amostra da placa, 2 placas PYO, 2 LTA37 e 2 LTA44 com 10 0 , placas 2ME com 10 -1 , placas 2ME com 10 -2 , 2 placas CBA e 2 R2A com 10 -4 , 2 placas CBA e 2 R2A com 10 -5 foram inoculadas. Para a amostra de escovas de dentes, 2 PYO, 2 ME, 2 LTA37 e 2 LTA44 com 10 0 , 2 placas ME com 10 -1 , 2 R2A com 10 - 2 , 2 placas CBA e 2 R2A com 10 -3 , foram inoculadas 2 placas CBA com 10 -4 . Para a amostra da pia, 2 placas PYO, 2 LTA37 e 2 LTA44 com 10 0 , 2 placas ME com 10 -1 , 2 ME e 2 placas R2A com 10 -2 , 2 placas CBA e 2 R2A com 10 -3 , foram inoculadas 2 placas CBA com 10 -4 . Para a amostra de água da torneira, todas as 18 placas foram inoculadas com 10 0 não diluídas. 0,2 ml de diluições relativas foram espalhados pela superfície das placas de ágar com métodos assépticos. Todas as placas foram deixadas secar antes da inoculação. 2 placas LTA44 foram colocadas na incubadora com 44 ƒ, 2 placas PYO, 2 LTA37 e 4 placas CBA foram colocadas na incubadora com 37 ƒ, 4 placas R2A e 4 ME foram colocadas na incubadora com 25 ƒ (United States Pharmacopeia, 2015).

Coleta de dados

As placas inoculadas foram coletadas e as colônias foram contadas para determinar as Unidades de Formação de Colônia (CFU) multiplicando o número médio de colônias por 5 para converter de 0,2ml para 1ml e é multiplicado pelo fator de diluição. O melhor número de colônias (30-60 colônias) foi contado para as placas que têm duas diluições plaqueadas sobre elas. O CFU foi calculado como a suspensão CFU ml -1 10 0 e precisou de conversões subseqüentes, exceto para a amostra de água da torneira. Para a placa, a suspensão CFU ml -1 10 0 foi multiplicada por 2,5 e dividida pelo peso da placa para determinar a UFC -1 em garrafa bijou de 2,5 ml. Para a escova de dentes, a suspensão CFU ml -1 10 0 foi multiplicada por 10 para determinar a cabeça CFU -1 na garrafa universal de 10 ml. Para a superfície da pia, a suspensão CFU ml -1 10 0 foi multiplicada por 2,5 e dividida por 4 para determinar a CFU cm -2 no 2,5 ml de garrafa bijou de um quadrado de 4cm 2 .

Resultados

Mean CFUs por unidade com SD: uma medida que é usada para quantificar a quantidade de variação ou dispersão de um conjunto de valores de dados. [1] Um desvio padrão baixo indica que os pontos de dados tendem a fique perto do significa (também chamou o valor esperado) do conjunto, enquanto um alto desvio padrão indica que os pontos de dados estão espalhados por uma ampla gama de valores.

Média com SD (Plaque CFUs por grama)

<table class ="" "table table-bordered">

Grupo 1 (com banheiro)

Grupo 2 (sem banheiro)

CBA

4.16 + 12 x 10 8

4.71 + 16 x 10 8

R2A

1.2 + 3.41 x 10 8

1.96 + 3.55 x 10 8

PYO

8.34 + 23.5 x 10 2

7.41 + 38.5 x 10 7

LTA37

4.7 + 23.4 x 10 2

8.49 + 4.33 x 10 3

LTA44

0

2.55 + 13.2 x 10 2

ME (leveduras)

3.35 + 8.78 x 10 4

9.51 + 49.2 x 10 5

ME (fil fungi)

1.72 + 6.2 x 10 4

2.95 + 5.71 x 10 3

Média com SD (UFC por escova de dentes por cabeça)

<table class ="" "table table-bordered">

Grupo 1 (com banheiro)

Grupo 2 (sem banheiro)

CBA

1.92 + 3.52 x 10 6

1.51 + 5.76 x 10 7

R2A

2.35 + 5.71 x 10 6

1.12 + 4.60 x 10 7

PYO

1.27 + 4.07 x10 4

2.78 + 14.4 x 10 8

LTA37

1.84 + 5.94 x10 4

2.54 + 12.9 x 10 6

LTA44

1.18 + 5.88 x 10 4

4.85 + 24 x 10 4

ME (leveduras)

2.10 + 9.78 x 10 4

3 + 13.6 x 10 5

ME (fil fungi)

2.59 + 11.8 x 10 4

1.34 + 2.26 x 10 2

Média com SD (pia por cm quadrado)

<table class ="" "table table-bordered">

Grupo 1 (com banheiro)

Grupo 2 (sem banheiro)

CBA

8.91 + 22.7 x 10 4

6.33 + 24.7 x10 5

R2A

2.56 + 11.5 x 10 5

7.82 + 36.7 x10 5

PYO

1.22 + 2.98 x 10 2

4.65 + 16 x10 3

LTA37

4.55 + 12.4 x10 2

5.73 + 16.9 x10 3

LTA44

4.24 + 14.5 x10

1.54 + 6.19 x10 2

ME (leveduras)

4.84 + 1.57 x 10 2

3.13 + 7.55 x10 3

ME (fil fungi)

1.40 + 1.76 x 10 2

4.71 + 18.5 x10 2

Média com SD (água da torneira CFU por mL)

<table class ="" "table table-bordered">

Grupo 1 (com banheiro)

Grupo 2 (sem banheiro)

CBA

1.53 + 2.14 x 10

1.5 + 7.69 x10 4

R2A

9.04 + 21.6 10

3.49 + 14.4 x10 4

PYO

8.46 + 30.7 10 -1

1.85 + 9.62 x10 -1

LTA37

0

3.7 + 19.2 x10 -2

LTA44

1.15 + 5.88 10 -1

0

ME (leveduras)

7.12 + 19.5

9.7 + 22.1

ME (fil fungi)

5.85 + 19.5

4.44 + 7.85

p-value. T-test de amostras independentes de duas colas (Grupo 1 vs Grupo 2) - 95% = P lt; 0,05 é significativo

<table class ="" "table table-bordered">

placa

escova de dentes

pia

Água da torneira

CBA

0.891

0.251

0.269

0,325

R2A

0,437

0.336

0.488

0,234

PYO

0.341

0.331

0,155

0.291

LTA37

0.334

0,324

0,118

0.331

LTA44

0.341

0.453

0,375

0,313

ME (leveduras)

0,356

0.300

0,086

0.654

ME (fil fungi)

0.241

0.283

0,370

0.731

A partir da tabela, observa-se a CFU na amostra de placa coletada de armazenar a escova de dentes com e sem o banheiro. Para o CBA e R2A, a CFU no grupo 1 (com WC) é contada como 4.16 + 12 x 10 8 CFU g -1 e 1.2 + 3.41 x 10 8 , respectivamente, e a CFU no grupo2 (sem banheiro) é marginalmente maior do que o grupo1, que resultou em 4.71 + 16 x 10 8 e 1,96 + 3,55 x 10 8 , respectivamente. Para o PYO, LTA37, LTA44 e ME (leveduras), a CFU do grupo 2 é ligeiramente superior ao grupo 1, exceto menos CFU (2.95 + 5,71 x 10 3 ) sem banheiro do que no banheiro (1.72 + 6.2 x 10 4 ) observado em ME (fil fungi). Verificou-se que o menor CFU está em LTA44 ou mesmo observado como 0 UFC por unidade, uma vez que 44 ƒ é sobre a temperatura ideal e as bactérias podem ser inativas. Além disso, para os outros grupos microbianos, escova de dentes, pia e as amostras de água da torneira, eles mostraram resultados similares à da amostra de placas que a UFC média por unidade do conjunto sem banheiro foi um pouco mais do que os conjuntos com banheiro no CBA, R2A , PYP, LTA37, LTA44 e ME (leveduras) e as UFC por unidade dos conjuntos sem banheiro foram ligeiramente inferiores aos conjuntos de banheiros. No entanto, as amostras na água da torneira avaliaram algumas diferenças dos outros grupos, segundo a qual a pequena quantidade de CFUs médias por ml dentro de cada amostra foi indicada desde a presença de coliformes fecais em água pode não ser diretamente prejudicial e não indicou necessariamente a presença de fezes.

No geral, a UFC da amostra de placa coletada sem banheiro é ligeiramente maior do que com o banheiro, mas provavelmente não há diferença óbvia entre dois grupos pelo exame de valor p.

O valor de P é usado para comparar o significado dos testes. A diferença significativa entre dois grupos pode ser determinada se o valor de p for menor que 0,05 e a hipótese nula não é suportada. A partir da tabela de teste t de amostra independente de duas colunas, indicou que todos os valores de p entre as diferentes placas de ágar dos 4 grupos microbianos são superiores a 0,05, o que mostrou que a diferença entre 2 grupos para qualquer tipo de amostra (com sanitários e sem banheiros) ou tipos médios não são significativos. Embora as tabelas tenham mostrado grande variabilidade dentro de uma determinada amostra, isso é comum para amostras ambientais e, portanto, a hipótese nula é suportada.

Discussão

A escova de dentes, a placa e as amostras de pia coletadas com ou sem os conjuntos de toalete, exceto a água da torneira, foram observadas para conter grande quantidade de coliformes e provou a presença de bactérias patogênicas, E. coli. A contaminação por escovas de dentes atua como um papel crucial na expansão de várias doenças, como infecção respiratória e doenças bucais (M. B. Dayoub, D. Rusilko e A. Gross, 1977). As escovas de dentes são muitas vezes armazenadas nos banheiros e reveladas à contaminação, pois é uma atmosfera microbiana com a ocorrência de bactérias patogênicas que são espalhadas por aerossóis e a descarga de banheiros (Taji SS, Rogers AH, 1998). Além disso, a presença de E. coli está correlacionada com as cerdas não limpas ou o armazenamento de escovas com alta umidade (pia) e ambiente quente que estão perto das cerdas e isso pode efetivamente aumentar a propagação e crescimento de bactérias do que as armazenadas em condições ventiladas em 70%. (R. T. Glass, 1992).

No entanto, os resultados experimentais mostraram que as unidades formadoras de colônias no banheiro sem banheiros eram maiores do que os conjuntos com banheiros que aparentemente são diferentes das hipóteses. Os valores de P de amostras independentes de duas colas t-test podem avaliar a situação. Embora a grande variabilidade dentro de uma dada amostra tenha sido observada, isso é comum para amostras ambientais. Devido à grande variabilidade, não há diferença significativa entre os dois grupos para qualquer tipo de amostra ou tipo médio. Os valores de p são superiores a 0,05, o que mostrou um nível de confiança de 95% que os dois parâmetros não são iguais e não há diferença suficiente dentro das amostras para concluir uma diferença, portanto a hipótese nula é aceita. Conclui-se que a escova de dentes seria contaminada, independentemente do armazenamento perto ou distante do banheiro.

Existem algumas limitações existentes nesta experiência. Em primeiro lugar, há uma quantidade gerenciável de dados para a análise que podem afetar a precisão dos resultados. Neste experimento, foram examinadas apenas 26 amostras e 27 amostras para cada grupo que não foram suficientemente elevadas para avaliar a hipótese. Mais tamanhos de amostra são sugeridos e, portanto, poder estatístico suficiente para os resultados finais pode ser determinado. Outro erro seria o erro de diluição, uma vez que a pipetagem para diluições de 10 vezes poderia levar a uma descida considerável da identidade esperada e resultados imprecisos. Sugere-se que a pipetagem precisa de 10 -1 para 10 -5 e o vortex apropriado com vibração de suspensão dentro de cada diluição sejam necessários. Além disso, pode ser sugerido mais tempo permitido para o primeiro laboratório de técnicas assépticas práticas e adequadas para garantir a precisão dos resultados.

Referência

M. B. Dayoub, D. Rusilko e A. Gross, Contaminação microbiana de escovas de dentes, Journal of Dental Research, vol. 56, não. 6, artigo 706, 1977. Ver no Google Scholar

R. T. Glass, Tipos de escova de dentes e retenção de microorganismos: como escolher uma escova de dentes biologicamente sólida, Journal-Oklahoma Dental Association, vol. 82, nº. 3, pp. 26-28, 1992. Ver no Google Scholar

Taji SS, Rogers AH. A contaminação microbiana das escovas de dentes. Um estudo piloto. Aust Dent J. 1998 Apr; 43 (2): 128-30

USP 61: Testes de enumeração microbiana (PDF). Farmacopeia dos Estados Unidos. Consultado em 24 de março de 2015.

Sandle, T. (julho de 2004). Uma abordagem para o relatório de resultados microbiológicos de sistemas de água. PDA J Pharm Sci Technol . 58 (4): 231-7.

Doyle, M. P. e M. C. Erickson. 2006. Fechar a porta do teste de coliformes fecais. Microbe 1: 162-163.

Sammons RL, Kaur D, Neal P. Sobrevivência bacteriana e formação de biofilmes em escovas de dentes convencionais e antibacterianas. Biofilmes. 2004; 1: 123-30.

Bodey, G.D., et ai. 1989. Infecções causadas por P. Aeruginosa . Rev. Infectar. Dis. ; 5: 279-313.